Рекомендации по размораживанию клеток
- Быстро разморозьте замороженные клетки (< 1 минута) на водяной бане при 37°C.
- Медленно разбавляйте размороженные клетки перед их инкубацией, используя предварительно подогретую питательную среду.
- Помещайте размороженные клетки в чашку с высокой плотностью для оптимизации восстановления.
- Всегда используйте надлежащие асептические методы и работайте в ламинарном боксе.
Зачем проводится размораживание клеток?
Очень важно правильно размораживать клетки, чтобы поддерживать жизнеспособность культуры и позволить культуре быстрее восстанавливаться. Некоторые криопротекторы, такие как ДМСО, токсичны при температуре выше 4 °C. Поэтому важно, чтобы культуры быстро размораживались и разводились в культуральной среде, чтобы свести к минимуму токсические эффекты.
Как происходит размораживание?
Оттаивание – это процесс доведения замороженного продукта из замороженного состояния до температуры (обычно выше 0°C), при которой не остается остаточного льда, т.е. «размораживание». Оттаивание часто рассматривается как просто обратный процесс замораживания.
Как лучше всего заморозить клетки?
Медленно замораживайте клетки, снижая температуру примерно на 1°C в минуту, используя криоморозильник с регулируемой скоростью или контейнер для криозаморозки, такой как «Mr. Frosty», доступный в лаборатории Thermo Scientific Nalgene (Nalge Nunc). Всегда используйте рекомендуемую среду для замораживания.
Как разморозить первичную ячейку?
Протрите флакон с ячейками снаружи 70% этанолом или изопропанолом. В боксе биобезопасности поверните крышку на четверть оборота, чтобы сбросить внутреннее давление, а затем снова затяните. Быстро разморозьте клетки на водяной бане с температурой 37°C, осторожно вращая флакон. Удалите флакон, когда останется небольшое количество льда.
