Держите их ХОЛОДНЫМИ! Процесс создания компетентных клеток сложен из-за необходимости, чтобы клетки оставались холодными. Это очень важно, потому что клетки такие чувствительные и хрупкие, пока их делают компетентными Поддержание низкой температуры помогает избежать гибели клеток во время обработки.
Почему реакции хранятся на льду во время эксперимента по трансформации?
Затем смесь плазмид и клеток кратковременно нагревают до 45–50°C, позволяя ДНК проникнуть в клетку через разрушенную мембрану. Затем нагретую смесь снова помещают на лед , чтобы сохранить плазмиды внутри бактерий … Если в растворе плазмидной ДНК слишком много соли, может возникнуть искрение, что поставит под угрозу трансформацию.
Почему вы кладете пробирки на лед?
Как вы думаете, почему мы положили пробирки на лед? Чтобы поместить ДНК в бактерии, мы должны проделать в них отверстия с помощью химического хлорида кальция (CaCl2). … Отверстия, проделанные для проникновения ДНК, оставляют бактерии негерметичными. Если мы не будем держать их на льду, они "истекут кровью" до смерти.
Какова роль ледяного хлорида кальция в приготовлении компетентных клеток?
Процесс преобразования теплового шока в хлорид кальция побуждает бактериальные клетки поглощать ДНК из окружающей среды. … Ледяной раствор CaCl2 облегчает связывание ДНК с поверхностью клетки, которая затем попадает в клетку после короткого периода теплового шока (3).
Как вы храните компетентные клетки?
Компетентные клетки следует хранить при - 80°C. Хранение при -20°C приведет к значительному снижению эффективности трансформации (TE). При тестировании на NEB 5-альфа-компетентной E. coli (NEB C2987H) клетки потеряли 94,5% TE уже через 24 часа хранения при -20°C.
