Если ваш белок не того же размера, что и ваше антитело, вы можете элюировать 0,1 М глицином, pH 2–3, а затем отделить интересующий белок от антитела с помощью SEC. (например, superdex 200).
Что такое элюирование белка?
Белки элюируют градиентом увеличения количества органического растворителя, такого как ацетонитрил. Белки элюируются в зависимости от их гидрофобности. После очистки с помощью ВЭЖХ белок находится в растворе, который содержит только летучие соединения и может быть легко лиофилизирован.
Почему белки элюируются с низким рН?
Известно, что использование буфера с низким pH для элюирования белка А способствует агрегации продукта Тем не менее, более ограниченный набор данных свидетельствует о том, что низкий pH может быть не единственным Причина агрегации в хроматографии белка А, скорее, другие аспекты процесса могут вносить значительный вклад.
Как проводится элюирование?
В аналитической и органической химии элюированием называется процесс извлечения одного материала из другого путем промывки растворителем; как при промывке загруженных ионообменных смол для удаления захваченных ионов. … После того как молекулы растворителя вытеснят аналит, его можно вынести из колонки для анализа.
Сколько антител нужно для Coip?
Для рутинных экспериментов с Co-IP я использовал антитело не более 2 мкг (в моем наборе 1,4–2,0 мкг антител достаточно для захвата 2500–5000 мкг белковый лизат.) Но он по-прежнему зависит от уровня экспрессии ваших целевых белков в ваших образцах, поэтому вам, вероятно, придется внести некоторые изменения.
