Вортексинг не будет срезать вашу РНК, чтобы сделать ее непригодной для использования, если вы выполняете случайную затравку RT - только если вы хотите клонировать длинную мРНК. Техническая поддержка Invitrogen также корректна. Хлороформ тяжелее тризола и осядет на дно пробирки.
Безопасно ли вортексировать РНК?
Не вортексируйте тризольные лизаты или образцы РНК во избежание сдвига. После экстракции всегда держите образцы РНК на льду. Этот протокол предназначен для образцов, лизированных 1 мл тризола в пробирке объемом 1,5 или 2 мл.
Можно ли нагревать РНК?
Поэтому избегайте высоких температур ( выше +65°C), так как они влияют на целостность РНК. Вместо этого, чтобы расплавить вторичные структуры, нагревайте РНК до +65°C в течение 15 минут в присутствии денатурирующих буферов.
Как вы ресуспендируете гранулы РНК?
ресуспендируйте осадок в теплой воде (40-50 градусов Цельсия). инкубировать при 45°С в течение 10 мин. поставить их в +4 на 4-6 часов.
Как вы осаждаете РНК?
A.
После того, как концентрация соли была скорректирована, РНК может быть осаждена путем добавления 2,5 объемов этанола или 1 объема изопропанола и тщательного перемешивания, с последующим охлаждением не менее 15 минут при -20°C.
