Как сделать иммунофлуоресценцию?

2024 Автор: Fiona Howard | [email protected]. Последнее изменение: 2024-01-10 06:42

Ниже приводится обзор различных этапов протокола непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания

1. Планирование эксперимента и подготовка образцов. …
2. Фиксация образца. …
3. Проницаемость клеток. …
4. Блокировка. …
5. Инкубация первичных антител. …
6. Инкубация вторичных антител. …
7. Контрастное окрашивание и монтаж.

Как вы проводите иммунофлуоресценцию?

Все этапы инкубации проходят при комнатной температуре

1. Промойте клетки дважды и с помощью пинцета осторожно поместите покровное стекло с перевернутыми клетками во влажную камеру.
2. Зафиксировать 4 % формальдегидом в течение 10 минут и промыть 3 раза.
3. Пропитайте 0,1 % раствором TX-100/PBS в течение 15–20 минут и промойте 3 раза.

Как вы используете иммунофлуоресценцию в клетке?

Протокол иммунофлуоресценции для адгезивных клеток

1. Посев 1–1,5 x10⁴ клеток на лунку 4-камерного предметного стекла в 500 мл культуральной среды. Инкубировать при 37°C и 5% CO_2.
2. 32–36 часов после посева клеток удалите среду для культивирования клеток и промойте клетки 3 раза, используя 500 мкл 1X PBS.

Что является примером иммунофлуоресценции?

Например, исследователь может создать первичные антитела у козы, которые распознают несколько антигенов, а затем использовать связанные с красителем вторичные антитела кролика, которые распознают константную область козьего антитела (" кроличьи анти-козьи" антитела).

В чем польза иммунофлуоресцентного окрашивания?

Иммунофлюоресцентное (ИФ) окрашивание является широко используемым методом в биологических исследованиях и клинической диагностике ИФ использует флуоресцентно-меченые антитела для обнаружения специфических антигенов-мишеней. Вслед за визуализацией, это очень прямая техника, так как вы действительно можете что-то увидеть.