Ниже приводится обзор различных этапов протокола непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания
- Планирование эксперимента и подготовка образцов. …
- Фиксация образца. …
- Проницаемость клеток. …
- Блокировка. …
- Инкубация первичных антител. …
- Инкубация вторичных антител. …
- Контрастное окрашивание и монтаж.
Как вы проводите иммунофлуоресценцию?
Все этапы инкубации проходят при комнатной температуре
- Промойте клетки дважды и с помощью пинцета осторожно поместите покровное стекло с перевернутыми клетками во влажную камеру.
- Зафиксировать 4 % формальдегидом в течение 10 минут и промыть 3 раза.
- Пропитайте 0,1 % раствором TX-100/PBS в течение 15-20 минут и промойте 3 раза.
Как вы используете иммунофлуоресценцию в клетке?
Протокол иммунофлуоресценции для адгезивных клеток
- Посев 1-1,5 x104 клеток на лунку 4-камерного предметного стекла в 500 мл культуральной среды. Инкубировать при 37°C и 5% CO2.
- 32-36 часов после посева клеток удалите среду для культивирования клеток и промойте клетки 3 раза, используя 500 мкл 1X PBS.
Что является примером иммунофлуоресценции?
Например, исследователь может создать первичные антитела у козы, которые распознают несколько антигенов, а затем использовать связанные с красителем вторичные антитела кролика, которые распознают константную область козьего антитела (" кроличьи анти-козьи" антитела).
В чем польза иммунофлуоресцентного окрашивания?
Иммунофлюоресцентное (ИФ) окрашивание является широко используемым методом в биологических исследованиях и клинической диагностике ИФ использует флуоресцентно-меченые антитела для обнаружения специфических антигенов-мишеней. Вслед за визуализацией, это очень прямая техника, так как вы действительно можете что-то увидеть.
